Luận án Nghiên cứu tạo kháng nguyên tái tổ hợp của virus gây bệnh cúm A/H7N9 bằng phương pháp biểu hiện tạm thời trong cây thuốc lá (Nicotiana Benthamiana) thông qua vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens

Tên luận án:

NGHIÊN CỨU TẠO KHÁNG NGUYÊN TÁI TỔ HỢP CỦA VIRUS GÂY BỆNH CÚM A/H7N9 BẰNG PHƯƠNG PHÁP BIỂ

Ngành:

TIẾN SỸ SINH HỌC

Tóm tắt nội dung tài liệu:

Luận án tập trung vào nghiên cứu tạo kháng nguyên tái tổ hợp của virus cúm A/H7N9, một chủng virus cúm gia cầm mới, nhằm đáp ứng tính cấp thiết trong việc phát triển vacxin thế hệ mới có khả năng bảo hộ cao. Nghiên cứu này hướng tới mục tiêu biểu hiện và xác định đặc điểm cấu trúc của kháng nguyên Hemagglutinin (HA) dạng trimeric và phức hệ kháng nguyên HA trimeric với hạt Nano kim cương (ND), đồng thời đánh giá hoạt tính sinh học và khả năng kích thích đáp ứng miễn dịch của chúng.

Về mặt khoa học, luận án cung cấp cơ sở quan trọng cho việc thiết kế các cấu trúc vector chuyển gen mang gen HA mono_ và các biến thể khác. Vacxin tiểu đơn vị được sản xuất trong thực vật là một hướng nghiên cứu mới đầy tiềm năng đã được đánh giá. Các phương pháp nghiên cứu bao gồm tổng hợp nhân tạo và thiết kế các vector hỗ trợ biểu hiện gen mã hóa kháng nguyên HA (HA mono_ELP, HA trimeric_ELP, HA trimeric, HA trimeric-IgMFc). Protein tái tổ hợp được tinh sạch bằng phương pháp đơn giản dựa trên sự gắn đuôi ELP, và khả năng hình thành oligomer của protein HA trimeric đã được kiểm tra bằng phản ứng liên kết ngang.

Kết quả nghiên cứu đã thành công trong việc tổng hợp và đặc trưng hóa hạt NDs, tạo phức hệ HA trimeric:ND và sàng lọc tỷ lệ trộn tối ưu. Hoạt tính sinh học của kháng nguyên tinh sạch HA trimeric-IgMFc được xác định qua phản ứng ngưng kết hồng cầu. Đặc biệt, cả kháng nguyên HA trimeric và phức hệ HA trimeric:ND đều cho thấy khả năng kích thích sinh kháng thể đặc hiệu với H7 ở chuột sau các lần tiêm. Phân tích đặc điểm cấu trúc của phức hệ HA trimeric tinh sạch khi kết hợp với hạt Nano kim cương cho thấy kích thước hạt ND tăng khoảng 80nm sau khi gắn kháng nguyên. Những phát hiện này góp phần đáng kể vào nỗ lực phòng chống virus cúm A.

Mục lục chi tiết:

• MỞ ĐẦU

  • 1. Tính cấp thiết của đề tài

  • 2. Mục tiêu nghiên cứu

  • 5. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của luận án

    • 5.1. Ý nghĩa khoa học

• CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

  • 3.1. Tổng hợp nhân tạo và thiết kết vector hỗ trợ biểu hiện gen mã hóa kháng nguyên HA

    • 3.1.1. Tổng hợp nhân tạo gen mã hóa kháng nguyên HA

      • 3.1.1.1. Phân tích trình

      • 3.1.1.2. Tạo vector chuyển gen pCB301_35S_HA mono_ ELP

    • 3.1.3. Kết quả tạo vector chuyển gen mã hóa kháng nguyên HA trimeric_ELP

      • 3.1.3.1. Tạo vector tách dòng pRTRA _35S_ HA trimeric_ELP

    • 3.1.4. Kết quả tạo vector chuyển gen mã hóa kháng nguyên HA trimeric

      • 3.1.4.1. Tạo vector tách dòng pRTRA _35S_ HA trimeric

    • 3.1.5. Tạo cấu trúc vector chuyển gen thực vật mang gen HA trimeric-IgMFc

      • 3.1.5.1. Tạo vector tách dòng mang gen mã hóa protein HA trimeric-IgMFc

      • 3.1.5.2. Tạo vector chuyển gen pCB301_35S_SP_ His_HA trimeric-IgMFc

  • 3.2.1.2. Kết quả tối ưu quy trình biểu

  • 3.3. Kết quả tạo phức hệ,

    • 3.3.1.2. Kết quả tổng hợp phức hệ HA trimeric:ND

    • 3.3.1.3. Kết quả sàng lọc tỷ lệ trộn protein HA trimeric và hạt ND

  • 3.3.2. Đánh giá khả năng ngưng kết hồng cầu của protein tinh sạch HA trimeric-IgMFc

  • 3.4. Đánh

• Chương 4 BÀN LUẬN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU