Đăng nhập để tải tài liệu không giới hạn
Tham gia 8.000+ người dùng Thư Viện Luận Án
Viện Công nghệ sinh học - Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam
Hà Hồng Hạnh
Luận án Nghiên cứu tái sinh in vitro và tạo cây ca cao (Theobroma cacao L.) chuyển gen
Chuyên ngành: Khoa học tự nhiên
Luận án
2014
1Đăng nhập để xem toàn bộ nội dung
Đăng nhập ngayMục lục
1. Lời nói đầu .......................... 3
2. Chương 1: Giới thiệu ............ 7
3. Chương 2: Nội dung nghiên cứu .. 28
4. Kết luận ................................ 70
Nghiên cứu tái sinh in vitro và tạo cây ca cao (Theobroma cacao L.) chuyển gen
Di truyền học
Luận án này đã tiến hành khảo sát và đánh giá khả năng tái sinh in vitro của cây ca cao, tập trung vào việc hình thành mô sẹo, phôi soma sơ cấp và thứ cấp, cũng như khả năng tạo chồi, ra rễ và phát triển thành cây hoàn chỉnh từ phôi soma. Nghiên cứu sử dụng nhị lép và cánh hoa từ 9 dòng ca cao thương mại tại Việt Nam làm vật liệu. Kết quả cho thấy, mô sẹo của các dòng TD1, TD3, TD5, TD7, TD8 và TD9 có khả năng hình thành phôi soma sơ cấp với tỷ lệ dao động từ 2,6% đến 44,0%, trong đó dòng TD8 đạt tỷ lệ cao nhất. Phôi soma thứ cấp cũng được thu nhận từ trục mầm và lá mầm của các dòng TD1, TD3, TD5, TD7, TD8 với tỷ lệ từ 5,0% đến 48,5%. Đáng chú ý, các phôi soma từ các dòng này đều có khả năng nảy mầm và phát triển bình thường thành cây hoàn chỉnh trong điều kiện nhà lưới.
Nghiên cứu đã phân lập thành công gen mã hóa chitinase (TcChi1) từ hệ gen của cây ca cao dòng TD3 và đăng ký trên Ngân hàng gen Quốc tế với mã số KF268030. Hoạt động của vector biểu hiện trong thực vật pCB301 mang gen TcChi1 đã được đánh giá trên cây thuốc lá mô hình.
Bên cạnh đó, quy trình chuyển gen sử dụng vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens chủng EHA105 vào phôi soma của dòng ca cao TD8 đã được chuẩn hóa thông qua gen chỉ thị gus/gusplus. Kết quả là đã tạo ra 3 dòng ca cao mang gen chỉ thị gusplus, với hiệu quả chuyển gen dao động từ 0% đến 1,4% dựa trên kết quả PCR dương tính của các cây tái sinh đã vượt qua giai đoạn chọn lọc.
Cuối cùng, gen mã hóa chitinase TcChi1 đã được chuyển thành công vào dòng ca cao TD8 thông qua Agrobacterium tumefaciens. Luận án đã thu được 2 dòng ca cao TD8 ở thế hệ T0 mang gen TcChi1 là TD8/pCB/TcChi1/2 và TD8/pCB/TcChi1/3, với hiệu quả chuyển gen cao nhất đạt 0,57%. Khả năng gắn kết ổn định của gen TcChi1 trong các cây ca cao chuyển gen này đã được khẳng định bằng kết quả lai Southern.
Tải không giới hạn tất cả tài liệu, không cần chờ. Chỉ từ 199.000đ/tháng.
Xem gói hội viên